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分光光度法的操作篇一

色譜過(guò)程是物質(zhì)分子在相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(固定相和流動(dòng)相)間分配平衡的過(guò)程，可用分配系數(shù)k和容量因子k描述。

例題：色譜過(guò)程使物質(zhì)分子在; a.溶液中達(dá)到平衡的過(guò)程b. 兩相中平衡的過(guò)程c. 固定相中分配的過(guò)程 d. 流動(dòng)相中溶解的過(guò)程

e. 相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(流動(dòng)相與固定相)間分配平衡的過(guò)程 答案: e

1.分配系數(shù)k=cs/cm，與組分、固定相和流動(dòng)相性質(zhì)和溫度有關(guān)。

2.容量因子k=ws/wm，不僅與組分、固定相和流動(dòng)相性質(zhì)和溫度有關(guān)，還與兩相體積有關(guān)。容量因子不等是色譜分離的先決條件。

3.色譜過(guò)程方程：保留時(shí)間與分配系數(shù)關(guān)系tr=t0(1+k)

第一節(jié) 薄層色譜法

分光光度法的操作篇二

掌握薄層色譜法的基本原理、操作方法以及在藥物鑒別、檢查中的應(yīng)用。

一、基本原理

1.吸附薄層色譜：吸附劑對(duì)不同組分a和b具有不同吸附能力，展開(kāi)劑也對(duì)a和b有不同溶解、解吸能力，當(dāng)展開(kāi)劑不斷展開(kāi)， a、b在吸附劑和展開(kāi)劑之間連續(xù)不斷吸附解吸，產(chǎn)生差速遷移得到分離。

2.比移值：rf=l/l0，為組分遷移距離與展開(kāi)劑遷移距離之比

比移值的最佳范圍是0.3～0.5，可用范圍是0.2～0.8。

影響比移值因素：①被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。極性較強(qiáng)的組分rf較小。②薄層板性質(zhì)。吸附劑活性越強(qiáng)，吸附作用就越強(qiáng)，rf越小。③展開(kāi)劑性質(zhì)。極性越強(qiáng)展開(kāi)劑rf值增大④展開(kāi)劑蒸氣飽和度對(duì)rf也有較大影響。

3.分離度：r=2d/(w1+w2)，兩相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)平均寬度的比值

二、操作方法

1.吸附劑和展開(kāi)劑的選擇

(1)吸附劑：常用有硅膠、氧化鋁、聚酰胺、硅藻土等。硅膠、氧化鋁的活性與含水量有關(guān)，含水量高，活性低，吸附力弱;聚酰胺表面的酰胺基可形成氫鍵，選擇性高。

(2)展開(kāi)劑：極性較強(qiáng)的展開(kāi)劑適用于極性較強(qiáng)組分的洗脫;極性較弱的展開(kāi)劑適用于極性較弱組分的洗脫。加入少量酸、堿可以使極性物質(zhì)斑點(diǎn)集中，減少拖尾，提高分離度。

選擇一般原則是，分離極性較強(qiáng)組分時(shí)選用活性低的薄層板，以極性強(qiáng)的展開(kāi)劑展開(kāi)。分離弱極性組分時(shí)，宜選用活性高的薄層板，以極性弱的展開(kāi)劑展開(kāi)。調(diào)整待測(cè)組分rf0.3～0.5范圍內(nèi)。

2.薄層板制備：1份固定相與3份水混和涂布，110℃烘30分鐘。

3.點(diǎn)樣與展開(kāi)：點(diǎn)樣一般為直徑2～4mm圓點(diǎn)，距底2.0cm;展開(kāi)距離一般為10～15cm。

4.斑點(diǎn)定位：有色可直接觀察;有熒光在紫外燈下觀察;噴灑顯色劑使組分顯色。

三、應(yīng)用 1.鑒別：比較供試品與對(duì)照品溶液的比移值 2.雜質(zhì)檢查：雜質(zhì)對(duì)照品比較法;高低濃度對(duì)比法